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豚鼠ELISA試劑盒操作流程和常見(jiàn)問(wèn)題解答

更新時(shí)間：2020-07-27      瀏覽次數(shù)：2332
 　　豚鼠ELISA試劑盒操作流程和常見(jiàn)問(wèn)題解答
　　豚鼠ELISA試劑盒操作流程如下：
　?。?）待測(cè)樣品孔中每孔加入待測(cè)樣品100μl，每種樣品設(shè)3個(gè)平行孔；設(shè)兩個(gè)陰性對(duì)照孔，每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl；另設(shè)一個(gè)空白對(duì)照孔，加入純細(xì)胞裂解液100μl。
　?。?）酶標(biāo)板置4℃，包被過(guò)夜。
　　（3）洗板：吸干孔內(nèi)反應(yīng)液，用洗滌液過(guò)洗一遍（將洗滌液注滿板孔后，即甩去），之后將洗滌液注滿板孔，浸泡1-2分鐘，間歇搖動(dòng)。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。
　　（4）陰性對(duì)照孔每孔加入PBS 50μl，樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。
　　（5）酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。
　　（6）洗板，同（4）。
　?。?）每孔加1:5000稀釋的HRP-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。
　?。?）酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。
　?。?）洗板，同（4）。
　　（10）每孔加TMB顯色液 100μl，輕輕混勻10s，置37℃暗處反應(yīng)15-20min。
　　（11）每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。
　　（12）分別測(cè)450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2，zui終測(cè)得的OD值為兩者之差（W1-W2），以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
　　（13）數(shù)據(jù)處理：在得出標(biāo)本（S）和陰性對(duì)照（N）的 OD值后，計(jì)算S/N值。S/N≥2.1為陽(yáng)性判定標(biāo)準(zhǔn)。
　　介紹一下豚鼠ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)操作的常見(jiàn)問(wèn)題。
　　一、一次ELISA實(shí)驗(yàn)需要多長(zhǎng)時(shí)間？
　　雙抗體夾心ELISA法一次實(shí)驗(yàn)需要3.5-4小時(shí)，競(jìng)爭(zhēng)ELISA法一次實(shí)驗(yàn)需要2-2.5小時(shí)。
　　二、血清樣本如何處理？
　　全血標(biāo)本于室溫放置2小時(shí)或4℃過(guò)夜后于1000×g離心20分鐘。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
　　三、血漿樣本如何處理？
　　建議選擇EDTA或者檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，于1000×g離心15分鐘，仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
　　四、細(xì)胞上清液樣本如何處理？
　　檢測(cè)分泌性的成份時(shí)，用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（1000×g）。仔細(xì)收集上清。
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